一、用RAPD技术分析
实验材料的种子在室温下浸泡12小时,在28℃光照培养箱中催芽,发芽后种植在花盆中,待长到3~4片叶龄时,取长势好、无病虫害的幼嫩茎叶提取DNA。
1.DNA的提取
采用在CTAB (Rogers、Bendich,1985) 基础上改进的SDS微量快速提取法提取,即取0.1g1~2周龄健康幼苗的嫩茎、叶,用小手术剪尽量剪碎,放入置于冰上的已灭菌的1.5ml离心管中,并加入400ul的DNA提取液 (50mm Tris-CL,25mm EDTA,300mm NaCl,1% SDS,1% PVP),用已灭菌的细的玻棒将材料充分捣碎,使溶液呈深绿色的糊状,再加入400ul的DNA提取液,充分混合均匀,从中取出400ul的混合液置于另一灭菌的1.5ml离心管中,而后加入400ul的氯仿,充分混合均匀,用10000rpm离 ...... (共2482字) [阅读本文]>>