15.2 嗜油菌的16S rDNA鉴定
分类：土壤中石油类污染物的迁移与修复1404字
15.2.1 16S rDNA序列分析
16S rDNA序列分析[403， 404]主要按照以下步骤。
(1) 采用生工SK1201-UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒提取基因组;
(2) 在16S rDNA基因的PCR扩增过程中，采用了如下的扩增条件和扩增的引物：
PCR扩增条件为：98℃预变性5min， 95℃变性35s， 55℃退火35s， 72℃延伸1min 30s， 35个循环，72℃延伸8min;
PCR扩增的引物是：P1正向引物为5′AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 3′ 20bp， P2反向引物为5′ GGTTACCTTGTTACGACTT 3′ 19bp;
(3) PCR产物的回收。采用SK1131-UNIQ-10 DNA胶回收试剂盒纯化回收DNA片断;
(4) 采用SK2211-T-载体PCR产物克隆试剂盒目的片断TA克隆。
a. 连接反应：
1μL 10×Ligation Buffer
1μL 50%PEG
50ng pUCm-T Vector
0.2pmol PCR Product
xμL H ...... （共1404字） [阅读本文]>>
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