5.2.3 犬瘟热病毒基因序列测定
分类：警犬良种保纯与繁育2810字
5.2.3.1 引物
科研人员对GenBank中已有的犬瘟热病毒F基因、H基因和L基因的保守序列分析后，设计合成了8 条引物(见表5-10)。
表5-10 8条引物序列及其在犬瘟热病毒mRNA上的位置
5.2.3.2 RT反应
取提取的总RNA 2 μg，加入RT反应液(50 mmol/L Tris-HCl，pH=8.3，室温，50 mmol/LKCl，10 mmol/L MgCl2，10 mmol/L DTT，0. 25 U/μl AMV反转录酶，0.5 mmol/L dNTP，1 U/μlRNA酶抑制剂，1 μmol/L引物P1或P5)20 μl，于42℃反应1～1.5 h。
5.2.3.3 PCR反应
取RT产物2 μl，加入扩增反应液(0.2 mmol/L dNTP，50 mmol/L KCl，2.5 mmol/LMgCl2，10 mmol/L Tris-HCl，pH=8.3，室温，0.01%明胶，上游引物1 μmol/L，下游引物1μmol/L，0.03 U/μl Taq酶)48 μl。PCR反应条件：94℃变性30 s，52℃退火50 s，72℃ ...... （共2810字） [阅读本文]>>
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