2.2.2 热启动PCR和Taq DNA聚合酶的修饰方法
随着PCR技术的发展,先后出现了一些问题,如非特异性扩增产物的出现,引物二聚体的形成,甚至凝胶电泳上无扩增带。这些问题的产生限制了PCR技术的应用。热启动PCR技术的问世解决了这些问题,使PCR技术更加完美。
2.2.2.1 热启动PCR的产生背景及原理
在传统的PCR反应中,反应体系各成分均是一次加入并进入循环,在反应温度由室温(25℃)上升至高温(94~95℃)过程中,可能发生引物错配和二聚体的形成。引物与模板中一些非靶位点的错配和引物之间形成的二聚体,在Taq DNA聚合酶的作用下均可延伸。这些非特异性产物又可在随后的PCR循环中继续扩增,使非特异性产物不断积累,同时也消耗反应体系的各 ...... (共2436字) [阅读本文]>>