(四) 柱前衍生法
本方法最低检出限,紫外检测为50pmol; 荧光检测为5pmol。
1. 原理
样品中的蛋白质经盐酸水解成游离氨基酸,用OPA/3-MPA-FMOC-CL分别进行一级氨基酸和二级氨基酸衍生,经HPLC反向分离后,用紫外或荧光检测。
2. 适用范围
本方法适用于食物及生物材料中氨基酸的检测。
3. 试剂
(1) 水为三蒸水并经Milli-Q超纯处理。
(2) 盐酸: (A.R.) 6mol/L。
(3) 苯酚: (A.R.) 重蒸馏。
(4) 乙腈: 色谱纯。
(5) 甲醇: 色谱纯。
(6) 无水乙醇: (A.R.)。
(7) 磷酸氢二钠: (A.R.) Na2HPO4·12H2O。
(8) 磷酸二氢钠: (A.R.) NaH2HPO4·2H2O。
(9) 12.5mmol/L磷酸盐缓冲液 (pH=7.2): 称取磷酸氢二钠6.267g,磷酸二氢钠1.170g溶于1800mL水中,用1mol/L HCl或NaOH调pH为7.20±0.02,用 ...... (共5350字) [阅读本文]>>