(五) 柱后衍生法
1. 原理
HPLC-OPA柱后衍生离子交换高效液相色谱法,样品中的蛋白质经盐酸水解成游离氨基酸,经氨基酸分析专用柱 (钠型离子交换柱),在流动相的梯度洗脱下,因流动相的pH逐渐增高,氨基酸逐渐失去正电荷,与离子交换树脂的结合逐渐减弱,最后便从树脂上被洗脱下来,由于各种氨基酸的结构不一样,酸碱度不一样,极性、相对分子质量不一样,电荷变化也不一样,因此对树脂的亲和力就不一样,从而达到分离的目的,分离后的氨基酸再由次氯酸把二级胺氧化成一级胺,用OPA进行衍生,荧光检测定量。
2. 适用范围
本方法最低检出限为10pmol。
3. 试剂
试剂为 (A.R.) 级,水为三蒸水经Milli-Q超纯处理。
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