二、超氧化物歧化酶SOD的制备与应用
(一) 从牛血中提取SOD
1. 加热除杂蛋白法
如图4-28所示的工艺流程,首先分离出血细胞。取新鲜牛血,按100kg牛血加3.8g柠檬酸三钠投料,搅拌均匀后装入离心管中,经3 000r/min离心15min,收集血细胞。用0.9%NaCl溶液清洗3遍 (每次用2倍于血细胞体积的NaCl溶液),然后加入与牛血等量的蒸馏水,在0~4℃条件下搅拌溶血30min,再缓慢加入溶血的血细胞0.25倍体积的95%乙醇和0.15倍体积的氯仿,其中乙醇和氯仿要预先冷却至4℃以下。搅拌均匀后静置20min,离心30min后收集上清液,弃去沉淀物。
在上清液中加入2倍体积的冷丙酮,搅拌均匀并冷却静置20min,离心收集沉淀。沉淀物用1~2倍其体积的水溶解,在55℃水浴中保 ...... (共3094字) [阅读本文]>>